Consilium medicum начало :: поиск :: подписка :: издатели :: карта сайта

Кардиологический вестник  
Том 13/N 1/2006 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Церамиды аорты человека в норме и при атеросклерозе


Н.Н.Самовилова*, Е.В.Грачева*, Н.К.Голованова*, А.А.Пиркова*, Л.М.Михалева**, Н.В.Проказова*

*Институт экспериментальной кардиологии, **НИИ морфологии человека РАМН, Москва

Цель исследования. Изучение структуры, содержания церамидов в аорте человека в норме и при атеросклерозе, а также роли глюкозилцерамид/b-глюкозидазного пути в их формировании.
Материал и методы. Содержание церамида определяли в образцах аорты (6 образцов - без признаков атеросклероза и 9 образцов - с атеросклеротическими поражениями), полученных от субъектов, умерших вследствие несчастного случая. Структура церамидов была охарактеризована методами 1Н-ЯМР и масс-спектрометрии. В лейкоцитах 5 пациентов с документированным атеросклерозом и 8 здоровых доноров определяли активность b-глюкозидазы, расщепляющей глюкозилцерамид до церамида.
Результаты. Установили, что аорта человека содержит свободные церамиды, N-ацил-эритро-D-С18-сфингозин с С22-С24 насыщенными и ненасыщенными жирными кислотами; их содержание повышено в 1,5 раза в атеросклеротической аорте по сравнению с непораженной тканью. Определение кинетики b-глюкозидазы показало заметные различия Км и Vмакс для фермента лейкоцитов больных коронарным атеросклерозом (9,5 мМ и 9,2 нмоль/ч/мг белка) и лейкоцитов здоровых доноров (5,8 мМ и 13 нмоль/ч/мг белка).
Заключение. Установлена структура свободных церамидов аорты человека. Содержание их в аорте человека повышается при атеросклерозе. Отмечено, что глюкозилцерамид/b-глюкозидазный путь образования церамида не делает значительного вклада в повышение его уровня. По-видимому, другой механизм образования церамидов - сфингомиелин/сфингомиелиназный - является основным при атеросклерозе. Этот путь может представлять потенциальную мишень для терапевтической модуляции уровня церамида как медиатора пролиферации и выживания клеток, а также клеточной смерти в кардиоваскулярной системе.
Ключевые слова: церамид, глюкозилцерамид, b-глюкозидаза, аорта человека, лейкоциты человека, атеросклероз.

N.N.Samovilova, E.V.Gracheva, N.K.Golovanova, A.A.Pirkova, L.M.Mikhaleva, N.V.Prokazova
Human aortic ceramides in health and atherosclerosis

Aim. To study the structure and levels of ceramides in the human aorta in health and atherosclerosis and the role of the glucosylceramide/b-glucosidase pathway in their formation.
Materials and Methods. The content of ceramides was measured in the aortic specimens (6 without the signs of atherosclerosis and 9 with atherosclerotic lesions) obtained from subjects who had died due to an accident. The structure of ceramides was characterized by 1H-NMR and mass spectrometry. The leukocytes from 5 patients with documented atherosclerosis and 8 healthy donors were used to determine the activity of b-glucosidase that splits glucosylceramide to ceramide.
Results. The human aorta was found to contain free ceramides, N-acyl-D-erythro-D-C18-sphingosine with C22-C24 saturated and unsaturated fatty acids; their content was elevated 1.5-fold in the atherosclerotic aorta in contrast to intact tissue. Determination of the kinetics b-glucosidase showed noticeable differences in KM and Vmax for the leukocyte enzyme in patients with coronary atherosclerosis (9.5 mM and 9.2 nmol/h/mg protein) and leukocytes of healthy donors (5.8 mM and 13 nmol/h/mg protein).
Conclusion. The structure of free human aortic ceramides was established. Their human aortic content increases in atherosclerosis. The glucosylceramide/b-glucosidase pathway of ceramide formation was ascertained to make no considerable contribution to its level elevation. Another mechanism responsible for ceramide formation - the sphingomyelin/sphingomyelinase pathway - appears to be essential in atherosclerosis. This pathway may be a potential target for the therapeutic modulation of the level of ceramide as a mediator of cell proliferation, survival, and death in the cardiovascular system.
Key words: ceramide, glucosylceramide, b-glucosidase, human aorta, human leukocytes, atherosclerosis.
  
Церамиды представляют собой амиды сфингозина и жирных кислот с 16-28 атомами углерода и являются структурными предшественниками большого класса сфинголипидов, в который входят сфингомиелин и гликосфинголипиды [1]. В последние 10 лет была установлена важная биологическая функция церамидов как внутриклеточного переносчика (вторичного мессенджера) сигнала при пролиферации и выживании клеток, а также при клеточной смерти. Церамиды непосредственно регулируют активируемые церамидами протеиновые фосфатазы и киназы, фосфолипазу А2, катепсин D, различные изоформы протеинкиназы С и c-Raf-1 [2]. Отмечен ряд эффектов церамидов в кардиоваскулярных клетках, например модуляция синтеза ДНК в эндотелиальных и гладкомышечных клетках, индукция апоптоза клеток сосудистой стенки, кардиомиоцитов и макрофагов [3].
   Установлено, что церамиды могут принимать участие в регуляции тонуса сосудов (ослаблять сократительный эффект адреналина) и, как предполагают, отвечают за независимое от эндотелия расслабление сосудов, вызываемое TNF-a [4]. Однако, как было показано в экспериментах на необработанных артериальных дисках, церамиды могут обладать противоположным эффектом - вызывать стойкую вазоконстрикцию, независимую от эндотелия [5]. Изучение процессов реоксигенации показало, что при ишемии/реперфузии сердца активируется сфингомиелин/церамидный путь проведения внутриклеточного сигнала [6], а образование свободных радикалов при гипоксии/реоксигенации сопровождается накоплением церамидов [7].
   В настоящей работе мы выявили присутствие свободных церамидов в стенке аорты человека и провели количественное определение их содержания в атеросклеротической и непораженной аортах. Исходя из ранее полученных данных об очень высоком содержании глюкозилцерамида в атеросклеротической аорте человека [8, 9], мы исследовали возможность образования свободного церамида под действием лизосомальной b-глюкозидазы лейкоцитов крови пациентов с атеросклерозом и доноров крови.   

Таблица 1. Содержание церамидов (в мг/г ткани) в стенке аорты человека в норме и при атеросклерозе

Образец ткани Непораженная стенка аорты Образец ткани Атеросклеротическая стенка аорты
1 0,194 1 0,273
2 0,224 2 0,303
3 0,208 3 0,254
4 0,214 4 0,289
5 0,210 5 0,297
6 0,198 6 0,321
    7 0,327
8 0,384
9 0,320
Средние значения* 0,208   0,308
*Различие между содержанием церамидов в стенке непораженной и атеросклеротической аорты, p<0,001.

Таблица 2. Активность b-глюкозидазы в лейкоцитах здоровых доноров и пациентов с коронарным атеросклерозом

Группа обследованных Активность, нмоль/ч/мг белка Диапазон
Здоровые доноры (n=8) 3,36±0,69 2,23-4,23
Пациенты с атеросклерозом (n=5) 2,69±1,12 0,97-3,7
Приведены средние значения ± стандартное отклонение.
Активность
b-глюкозидазы определена при концентрации субстрата 6 мМ.
Различия между двумя группами статистически недостоверны.

Зависимость активности b-глюкозидазы от концентрации субстрата. График Лайнуивера - Берка. Мембраны лейкоцитов (50-70 мкг белка)
инкубировали в течение 1 ч при 37оС в присутствии возрастающих концентраций субстрата 4-МУГ (2-25 мМ). А - пациент с атеросклерозом; Б - здоровый донор.


Материал и методы
   
В работе использованы аналитически чистые химические реагенты. Хлороформ, метанол, ацетон, бензол и другие растворители были перегнаны. Для тонкослойной хроматографии (ТСХ) использовали готовые пластинки с силикагелем 60 (DC) и высокоразрешающие пластинки (HPTLC) фирмы "Merck", Германия. Силикагель 40-100 мкм и Silperl (Чехия) были использованы для колоночной хроматографии. Lichroprep C8 Merck (Германия) был использован для обращенно-фазовой хроматографии. Стандартные вещества для хроматографии (холестерин - ХС, эфиры ХС, триолеин, дипальмитин, олеиновая кислота, церамид и сфингозин) были приобретены у фирмы "Sigma". 4-метилумбеллиферил-b-D-глюкопиранозида (4-МУГ) и 4-метилумбеллиферон (4-МУ) куплены у фирмы "Koch-Light".
   Исследование проводили в соответствии с принципами Хельсинкской декларации [10]. Аорты 25-65-летних мужчин и женщин, умерших в результате несчастного случая, были взяты асептически не позднее чем через 12 ч после смерти. Адвентиция вместе с одной третью наружной медии была отделена, оставшаяся часть материала была заморожена в жидком азоте, они хранились при -70оC до анализа.
   Для сравнительного исследования содержания церамида в атеросклеротической и непораженной аорте типы атеросклеротических поражений были определены по классификации Smith [11].
   Ткань аорты (несколько образцов общей массой около 20 г) была гомогенизирована и экстрагирована хлороформ-метанолом (2:1, об/об, 20 мл на 1 г влажной ткани), как описано ранее [8]. Суммарные липиды были фракционированы на колонке с силикагелем: 7 г их были нанесены на колонку (30 ґ 40 см), заполненную 200 г силикагеля 40-100 мкм в хлороформе. Эфиры ХС, триглицериды и свободный ХС были элюированы 600 мл хлороформа. Затем колонка была последовательно промыта смесью (по 100 мл каждая) хлороформа и метанола в соотношении 95:5, 90:10, 80:20, 70:30, 60:40, об/об. Фракции (по 5 мл) были мониторированы ТСХ на пластинках DC, используя системы растворителей гексан/эфир/уксусная кислота (85:15:1 об/об/об), эфир/бензол/гексан (90:9:1 об/об/об), хлороформ/метанол/вода (120:10:1 об/об/об). Пластинки обнаруживали обрызгиванием 5% раствором фосфорно-молибденовой кислоты в этаноле с последующим нагреванием при 120оС. Фракции, содержащие компоненты с хроматографической подвижностью, близкой к стандартному церамиду, были собраны и рехроматографированы на колонке (25 ґ 1,5 см), заполненной 18 г силикагеля Silperl в хлороформе. После того как колонка была промыта 600 мл хлороформа, элюцию проводили линейным градиентом между хлороформом (75 мл) и смесью хлороформ/ацетон 1:1 об/об (75 мл). Собранные фракции (по 5 мл) были мониторированы ТСХ, как описано выше.
   Дальнейшую очистку церамидов аорты проводили обращенно-фазовой хроматографией на колонке Lichroprep C8 (5 ґ 0,5 см), используя в качестве мобильной фазы метанол/трифторуксусная кислота/вода (98:1:0,1 об/об/об) с градиентным добавлением хлористого метилена. Фракции (0,5 мл) были мониторированы ТСХ в системе хлороформ/метанол (9:1). Церамид, идентифицированный при ТСХ сравнением со стандартом, составлял около 3 мг сухого вещества.
   1Н-ЯМР, спектры были получены на импульс-Фурье-спектрометре WH-500 ("Bruсker", Германия) при 25оC и химический сдвиг был рассчитан относительно внутреннего стандарта (CH3)4Si в CDCl3.
   Масс-спектры получены на масс-спектрометре SSQ-710 (Fningan MAT, USA).
   Исследованы масс-спектры десорбционной химической ионизации (ДХИ) изобутаном и ионизации быстрыми атомами (FAB) в матрице о-нитробензилового спирта и ионизирующего газа ксенона.
   Количественное определение церамидов в суммарных липидах аорты проводили по методу Э. В. Дятловицкой [12]. Липиды выделяли из гомогенатов образцов аорты, взятых от каждого индивидуума, пятикратной экстракцией смесями хлороформ/метанол (2:1 и 1:2 об/об), после чего объединенные экстракты упаривали, растворяли в смеси хлороформ/метанол (2:1 об/об) и промывали добавлением 1/4 от объема воды и разделением слоев. Для анализа церамидов органический слой высушивали, остаток растворяли в 1-2 мл смеси хлороформ/метанол (2:1 об/об). ТСХ церамидов и последующее денситометрирование проводили на пластинках HPTLC (10 ґ 10 см). На пластинку наносили 1 мкл исследуемого раствора (три параллельных нанесения) и по 3-4 мкл (1 нмоль/мкл) стандартного церамида (три параллельных нанесения). Хроматографию проводили последовательно сначала в эфире, а затем после высушивания в системе хлороформ/метанол (9:1 об/об). После высушивания хроматограмму обрызгивали 5% раствором фосфорно-молибденовой кислоты в этаноле и нагревали при 160оС в течение 5 мин. Появившиеся пятна денситометрировали на денситометре "Сорбфил" (Россия), используя компьютерную программу Сорбфил 1.0. Содержание церамида выражали в мг на 1 г влажной ткани аорты.
   Материалом исследования активности b-глюкозидазы в лейкоцитах служили лейкоциты крови больных (5 мужчин в возрасте от 31 до 75 лет) с коронарным атеросклерозом, подтвержденным данными коронарной ангиографии и нагрузочной велоэргометрической пробой. Контролем служили лейкоциты здоровых доноров (8 мужчин в возрасте от 19 до 35 лет). Выделение лейкоцитов из периферической крови проводили осаждением эритроцитов с помощью смеси декстрана, лимонной кислоты и глюкозы по методу Skoog и др. [13]. Активность b-глюкозидазы определяли в цельном лейкоцитарном гомогенате по расщеплению флюорогенного субстрата - 4-МУГ. Гомогенат лейкоцитов (40-100 мкг белка) инкубировали с 6 мМ 4-МУГ в 0,2 М ацетатном буфере, рН 5,0, с 0,6% таурохолатом натрия (конечный объем 0,2 мл) в течение 1 ч при 37oС. Реакцию останавливали 4 мл 0,2 М глицинового буфера, рН 10,4. Флюоресценцию проб измеряли на спектрофлюориметре Hitachi А-3000 с фильтром возбуждения l=365 нм и фильтром эмиссии l=450 нм. В качестве стандарта для построения калибровочной кривой использовали 4-МУ. Активность b-глюкозидазы выражали в нмолях образовавшегося 4-МУ за 1 ч на 1 мг белка гомогената лейкоцитов. При построении субстратной кривой (кривой Михаэлиса - Ментен) концентрация 4-МУГ была 2-25 мМ. Значения Км и Vмакс определяли линеаризацией кривой в координатах Лайнуивера-Берка. Белок гомогената определяли по методу Петерсона [14]. Статистическую обработку данных проводили на компьютере с помощью программы SigmaStat 3.0.   

Результаты и обсуждение
   
Церамиды были выделены из суммарных липидов аорты человека несколькими последовательными хроматографиями; их структура была подтверждена методами 1Н-ЯМР и масс-спектрометрии. В ЯМР-спектре были зарегистрированы все характерные для церамида [15] пики сигналов с химическим сдвигом dн (CDCl3): 0,89 (6H, CH3), 1,26 (40-46H,CH2), 1,56 (2H) 2,01-2,07 (2H, =CH-CH2-), 2,22 (2H, J=8,2Hz, NH-CO-CH2-), 3,91-3,98 (2H, J=Hz), 4,35 (H, CH(OH)CH=), 5,55 (H, J=6,4Hz, CH(OH)CH=), 5,77-5,79 (H, J=6,7Hz, CH2CH=), 6,2 (H, J=6,8Hz, NH), которые свидетельствуют о том, что в церамидах аорты человека сфингозиновым основанием является D-эритро-сфингенин. Масс-спектрометрия с десорбционной химической ионизацией показала присутствие в спектрах главных квазимолекулярных ионов МН+ с m/z 646, 648 и 650, соответствующих церамидам с C24:2, C24:1 и C24:0 незамещенными жирными кислотами как основными компонентами, и 620, 622, 662 и 664, соответствующих церамидам с C22:1 и С22:0 незамещенными жирными кислотами и C24:1, и C24:0 a-ОН кислотами как малыми компонентами. Эти данные были подтверждены анализом церамидов аорты масс-спектрометрией с ионизацией быстрыми атомами (FAB), который показал также присутствие иона с m/z 264, свидетельствующего о том, что единственным сфингозиновым основанием в церамидах аорты явлется С18-сфингенин.
   Содержание церамида было определено в суммарных липидах, полученных из аорт с атеросклеротическими поражениями и из аорт без признаков атеросклероза. Как показано в табл. 1, содержание церамида в атеросклеротической аорте было достоверно повышено в 1,5 раза.
   Глюкозилцерамид может быть источником церамида наряду со сфингомиелином [16]. Накопление этого гликосфинголипида было интенсивно изучено при генетическом дефекте лизосомальной b-глюкозидазы (наследственный липидоз - болезнь Гоше), который диагностируется по снижению активности b-глюкозидазы в суммарных лейкоцитах крови [17]. По аналогии с болезнью Гоше активность b-глюкозидазы лейкоцитов крови была охарактеризована в группе больных с коронарным атеросклерозом в сравнении с группой здоровых доноров. Как видно из данных табл. 2, наблюдается тенденция к снижению средней способности лейкоцитов пациентов расщеплять флюорогенный синтетический субстрат 4-МУГ, по сравнению с таковой лейкоцитов здоровых доноров. Определение кинетики b-глюкозидазы показало заметные различия Км и Vмакс для фермента лейкоцитов больных коронарным атеросклерозом (9,5 мМ и 9,2 нмоль/ч/мг белка) и лейкоцитов здоровых доноров (5,8 мМ и 13 нмоль/ч/мг белка; см. рисунок).
   Церамиды являются медиаторами апоптоза и образуются внутриклеточно как продукт катаболизма сфингомиелина (сфингомиелин/сфингомиелиназный механизм) и/или расщеплением глюкозилцерамида (глюкозилцерамид/b-глюкозидазный механизм) лизосомальными и цитоплазматическими гидролазами [2]. Ранее было показано, что в стенке аорты человека при атеросклерозе наблюдается значительное повышение содержания глюкозилцерамида [8, 9, 18, 19].
   Чтобы выяснить, с одной стороны, возможность участия глюкозилцерамида атеросклеротической аорты в формировании церамида и, с другой стороны, понять причину накопления глюкозилцерамида в стенке аорты при атеросклерозе, мы изучили активность b-глюкозидазы, которая отщепляет церамид от глюкозилцерамида. Известные случаи накопления глюкозилцерамида в тканях обусловлены мутациями в генах либо самого фермента [20], либо его активаторного белка (SAP-C) [21]. Принимая во внимание тот факт, что b-глюкозидаза - мембранный фермент, наблюдаемое снижение активности фермента может быть следствием изменения липидного состава клеточных мембран при атеросклерозе.
   Проведенные в настоящей работе исследования показали, что b-глюкозидаза лейкоцитов пациентов имела более низкое сродство к субстрату и медленнее расщепляла субстрат, чем фермент здоровых доноров. Таким образом, 20-30-кратное накопление глюкозилцерамида в интиме аорты при атеросклерозе может быть следствием снижения активности b-глюкозидазы, но маловероятно, что этот гликосфинголипид при атеросклерозе является источником свободного церамида. По-видимому, основным механизмом образования церамида в стенке аорты при атеросклерозе является другой, сфингомиелин/сфингомиелиназный механизм.
   В ходе настоящих исследований установлено, что аорта человека содержит свободный церамид, N-ацил-эритро-D-С18-сфингозин с С22-С24 насыщенными и ненасыщенными жирными кислотами; его содержание в 1,5 раза повышено в атеросклеротической аорте по сравнению с содержанием в непораженной ткани. Для выяснения механизма накопления церамида в атеросклеротической аорте человека необходимы дополнительные исследования, которые представляют интерес в свете данных о физиологической роли этого сфинголипида. В последние годы широко обсуждается роль церамида в апоптозе различных типов клеток, в том числе клеток сосудистой стенки [22-24]. Установлено, что при ишемии активируется сфингомиелиназа, что может приводить к накоплению церамида, который в стенке сосудов является медиатором апоптоза - процесса, приводящего к эрозии бляшки с последующим тромбозом [25]. Факторы, инициирующие атеросклероз, такие как окисленные липопротеины низкой плотности (ЛПНП), цитокины (TNF-a и IL-1b) или ростовые факторы, стимулируют гидролиз сфингомиелина и образование церамида в эндотелиальных клетках in vitro, что приводит к повышению адгезии к ним моноцитов [26]. С другой стороны, ЛПНП, обогащенные синтетическим аналогом церамида с низкомолекулярной жирной кислотой, интенсивнее захватываются эндотелиальными клетками и вызывают их апоптоз [27]. Таким образом, продукты метаболизма сфингомиелина, в частности церамид, запускают такие процессы атерогенеза, как пролиферация, дифференцировка и остановка роста, а также апоптоз. Дальнейшее изучение роли церамида как посредника в проведении внутриклеточного сигнала может позволить сформировать новый взгляд на патогенез болезней и выработать стратегию избирательного терапевтического вмешательства в онкологические, кардиоваскулярные, нейродегенеративные и другие болезни [28]. Примером могут служить данные R.Charles и соавт. [29], которые показали, что аналоги церамида при прямом воздействии на поврежденную стенку артерии обладают антипролиферативным эффектом.   

Литература
1. Дятловицкая Э.В. Зависимость биоэффекторных свойств сфинголипидов от строения их гидрофобного фрагмента. Биохимия 1998; 63 (1): 67-74.
2. Kolesnick R. The therapeutic potential of modulating the ceramide/sphingomyelin pathway. J Clin Invest 2002; 110 (1): 3-8.
3. Levade T, Auge N, Veldman RJ et al. Sphingolipid mediators in cardiovascular cell biology and pathology. Circ Res 2001; 89 (11): 957-68.
4. Johns DG, Webb RC. TNF-alpha-induced endothelium-independent vasodilation: a role for phospholipase A2-dependent ceramide signaling. Am J Physiol 1998; 275 (5): H1592-8.
5. Auge N, Escargueil-Blanc I, Lajoie-Mazenc I et al. Potential role for ceramide in mitogen-activated protein kinase activation and proliferation of vascular smooth muscle cells induced by oxidized low density lipoprotein. J Biol Chem 1998; 273 (21): 12893-900.
6. Zheng T, Li W, Wang J et al. Sphingomyelinase and ceramide analogs induce contraction and rises in [Ca
2+]i in canine cerebral vascular muscle. Am J Physiol Heart Circ Physiol 2000; 278 (5): H1421-8.
7. Zager RA, Iwata M, Conrad DS et al. Altered ceramide and sphingosine expression during the induction phase of ischemic acute renal failure. Kidney Int 1997; 52 (1): 60-70.
8. Prokazova NV, Mukhin DN, Orekhov AN et al. Neutral glycolipids of atherosclerotic plaques and unaffected human aorta tissue. Eur J Biochem 1989; 180 (1): 167-71.
9. Chatterjee SB, Dey S, Shi WY et al. Accumulation of glycosphingolipids in human atherosclerotic plaque and unaffected aorta tissues. Glycobiol 1997; 7 (1): 57-65.
10. Rickham PP. Human Experimentation. Code of ethics of the World Medical Association. Declaration of Helsinki. Br Med J 1964; 5402: 177.
11. Smith EB, Slater RS. Lipoproteins and the reversibility of atherosclerosis. Lancet 1972; 1 (7755): 840.
12. Дятловицкая Э.В. Церамиды и ганглиозиды яичников человека при старении. Биохимия 1999; 60 (8): 1302-6.
13. Skoog WA, Beck WS. Studies on the fibrinogen, dextran, and phytohemagglutinin methods of isolating leukocytes. Blood 1956; 11 (5): 436-54.
14. Peterson GL. A simplification of the protein assay method of Lowry et al. which is more generally applicable. Anal Biochem 1977; 83 (2): 346-56.
15. Koike K, Sugimoto M, Sato S et al. Total synthesis of globotriaosyl-E and Z-ceramides and isoglobotriaosyl-E-ceramide.Carbohydr Res 1987; 63 (2): 189-208.
16. Holleran WM, Takagi Y, Imokawa G et al. beta-Glucocerebrosidase activity in murine epidermis: characterization and localization in relation to differentiation. J Lipid Res 1992; 33 (8): 1201-9.
17. Michelin K, Wajner A, Bock H et al. Biochemical properties of beta-glucosidase in leukocytes from patients and obligated heterozygotes for Gaucher disease carriers. Clin Chim Acta 2005; 362 (1-2): 101-9.
18. Mukhin DN, Chao FF, Kruth HS. Glycosphingolipid accumulation in the aortic wall is another feature of human atherosclerosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol 1995; 15 (10): 1607-15.
19. Bobryshev YV, Lord RS, Golovanova NK et al. Incorporation and localisation of ganglioside GM3 in human intimal atherosclerotic lesions. Biochim Biophys Acta 1997; 1361 (3): 287-94.
20. Brady RO, Kanfer JN, Bradley RM, Shapiro DJ. Demonstration of a deficiency of glucocerebroside-cleaving enzyme in Gaucher's disease. Clin Invest 1966; 45 (7): 1112-5.
21. Sandhoff K, Kolter T, Van Echten-Deckert G. Sphingolipid metabolism. Sphingoid analogs, sphingolipid activator proteins, and the pathology of the cell. Ann NY Acad Sci 1998; 845: 139-51.
22. Tabas I. Secretory sphingomyelinase. Chem Phys Lipids 1999; 102 (1-2): 123-30.
23. Hofmann K, Dixit VM. Ceramide in apoptosis: does it really matter? Trends Biochem Sci 1998; 23 (10): 374-7.
24. Kolesnick R, Hannun YA. Ceramide and apoptosis. Trends Biochem Sci 1999; 24 (6): 224-5.
25. Hernandez OM, Discher DJ, Bishopric NH et al. Rapid activation of neutral sphingomyelinase by hypoxia-reoxygenation of cardiac myocytes. Circ Res 2000; 86 (2): 198-204.
26. Li H, Junk P, Huwiler A et al. Dual effect of ceramide on human endothelial cells: induction of oxidative stress and transcriptional upregulation of endothelial nitric oxide synthase. Circul 2002; 106 (17): 2250-6.
27. Boyanovsky B, Karakashian A, King K et al. Uptake and metabolism of low density lipoproteins with elevated ceramide content by human microvascular endothelial cells: implications for the regulation of apoptosis. J Biol Chem 2003; 278 (29): 26992-9.
28. Claus R, Russwurm S, Meisner M et al. Modulation of the ceramide level, a novel therapeutic concept? Curr Drug Targets 2000; 1 (2): 185-205.
29. Charles R, Sandirasegarane L, Yun J et al. Ceramide-coated balloon catheters limit neointimal hyperplasia after stretch injury in carotid arteries. Circ Res 2000; 87 (4): 282-8.



В начало
/media/cardio/06_01/38.shtml :: Wednesday, 04-Oct-2006 23:07:05 MSD
© Издательство Media Medica, 2000. Почта :: редакция, webmaster