Consilium medicum начало :: поиск :: подписка :: издатели :: карта сайта

ИНФЕКЦИИ И АНТИМИКРОБНАЯ ТЕРАПИЯ  
Том 3/N 5/2001 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Влияние гранулоцитарного колониестимулирующего фактора на антикандидозную активность нейтрофильных лейкоцитов больных гемобластозами при нейтропении


З.Н.Никифорова*, В.Е.Шевченко*, Н.В.Дмитриева**, Н.Е.Арноцкая*, А.С.Ягубов*

*Лаборатория молекулярно-биологических методов исследования, **Лаборатория микробиологической диагностики и лечения инфекций в онкологии, РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН, Москва

Введение
   
Онкологические больные подвержены высокому риску развития инфекций вследствие влияния, как опухолевого процесса, так и противоопухолевой терапии. По данным нашей клиники, инфекция является причиной гибели каждого третьего больного [1]. За последние 30 лет прослеживается тенденция возрастания степени высеваемых условно-патогенных грибов и, вследствие этого, роста грибковых инфекций. Большинство выделенных грибов представлено Candida spp.[1] Важнейшим фактором риска возникновения инвазивного кандидоза является продолжительная нейтропения, индуцированная цитостатиками.
   Лечение кандидоза на фоне тяжелого иммунодефицита и нейтропении редко бывает успешным, поэтому актуальным является восстановление пула нейтрофильных лейкоцитов (НЛ) и их функциональной активности, так как НЛ являются одними из основных звеньев механизма защиты
от Candida spp [2].
   В этой связи особое внимание уделяется гранулоцитарному колониестимулирующему фактору (Г-КСФ), который способствует пролиферации и дифференциации гематопоэтических клеток. Также известно, что Г-КСФ усиливает функциональную активность нейтрофилов [3 – 6]. Тем не менее не достаточно изучено влияние Г-КСФ на антикандидозную активность НЛ у больных гемобластозами. Поэтому целью представленного исследования была оценка влияния Г-КСФ на изменение кислородозависимой антикандидозной активности НЛ больных гемобластозами после цитостатической терапии.    

Таблица 1. Изменение активности покоящихся нейтрофилов больных гемобластозами через 144 и 360 ч после клинического использования Г-КСФ

Больной, №

Диагноз заболевания

Кратность введения Г-КСФ (дни)

Асп (ЛХЛ)
относительно контроля (%)

Асп (ЛЦХЛ) относительно контроля (%)

Sсп (ЛХЛ ) относительно контроля (%)

Sсп (ЛЦХЛ) относительно контроля (%)

Через 360 ч после клинического применения Г-КСФ

1

Острый лимфобластный лейкоз, вариант М2**

4

1183

721

1439

928

2

Лимфогранулематоз,стадия VIА**

3

1483

987

1747

443

3

Т-лимфобластная лимфома, IVА стадия*

2

54

749

52

692

Через 144 ч после клинического применения Г-КСФ

4

Лимфома Беркитта

5

460

565

565

750

5

Диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома, IVБ стадия

3

667

460

710

381

6

Диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома, IVБ стадия*

3

177

125

183

144

7

Острый лимфобластный лейкоз, вариант М2

3

5

15

5

11

Примечание. * – граноцит (остальным больным назначали нейпоген); ** – из зева выделили Candida spp. до введения Г-КСФ.

Материалы и методы исследования
   
Исследовали периферическую кровь у 7 больных гемобластозами в возрасте от 16 до 53 лет (табл. 1, 2). При анализе гемограммы у больных выявлена нейтропения IV степени. Через 1 день после окончания курса цитостатической терапии больным назначены Г-КСФ. Нейпоген (Г-КСФ) был назначен 5 больным в дозе 5 мкг/кг 1 раз в день, подкожно от 3 до 7 дней; граноцит (Г-КСФ) – 2 больным в дозе 263 мкг/кг 1 раз в день, подкожно в течение 2 – 3 дней (см. табл. 1).
   Получение суспензии нейтрофилов. Нейтрофильные лейкоциты получали на градиенте плотности фиколл-верографина [7]. Исследовали динамику изменения кислородозависимой активности НЛ до клинического применения Г-КСФ (контрольная точка) и через 3, 24, 72, 144 и 360 ч после введения Г-КСФ.
   Хемилюминесцентный метод. Продукцию активных форм кислорода (АФК) нейтрофилами регистрировали с помощью хемилюминометра LKB 1251 (Финляндия) [8]. Хемилюминесценцию оценивали по следующим параметрам: Асп – средняя интенсивность фоновой/спонтанной люминолзависимой хемилюминесценции (ЛХЛ) или люцегининзависимой хемилюминесценции (ЛЦХЛ); Аинд – максимальное значение реактивной ЛХЛ или ЛЦХЛ; Sинд – светосумма ЛХЛ или ЛЦХЛ ответа нейтрофилов за период времени t от момента (t=0) добавления активатора. Коэффициент фагоцитоза (КФ) ЛХЛ или ЛЦХЛ вычисляли по формуле: КФ=S-S0/S0, где S – светосумма ЛХЛ или ЛЦХЛ ответа НЛ за период времени t от момента (t=0) добавления опсонизированных, убитых грибов
Candida albicans или раствора Хенкса (S0).
   К – коэффициент отношения ЛЦХЛ к ЛХЛ – пропорциональный удельному количеству супероксидного анион-радикала в общей продукции АФК. Обработку данных производили на с использованием программы “Luminograf” и пакета Excel (“Microsoft”, США)
.

Таблица 2. Изменение кислородозависимой антикандидозной активности нейтрофилов больных гемобластозами через 144 и 360 ч после клинического использования Г-КСФ

Больной, №

Диагноз заболевания

Кратность введения Г-КСФ (дни)

Аинд (ЛХЛ, C.albicans) относительно контроля (%)

Аинд (ЛЦХЛ, C.albicans) относительно контроля (%)

Sинд (ЛХЛ, C.albicans) относительно контроля (%)

Sинд (ЛЦХЛ, C.albicans) относительно контроля (%)

K (ЛЦХЛ/ЛХЛ)

Через 360 ч после клинического применения Г-КСФ

1

Острый лимфобластный лейкоз, вариант М2**

4

2419

615

1507

243

0,14

2

Лимфогранулематоз, стадия VIА**

3

3703

650

2216

457

0,17

3

Т-лимфобластная лимфома, IVА стадия*

2

912

626

1461

138

0,08

Через 144 ч после клинического применения Г-КСФ

4

Лимфома Беркитта

5

1559

787

759

447

0,58

5

Диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома, IVБ стадия

3

757

338

496

180

0,15

6

Диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома, IVБ стадия*

3

460

192

425

92

0,22

7

Острый лимфобластный лейкоз, вариант М2

3

3

19

3

9

1,7

Примечание. * – граноцит (остальным больным назначали нейпоген); ** – из зева выделили Candida spp. до введения Г-КСФ.

Результаты и обсуждение
   
Под воздействием микроорганизмов в НЛ происходит ряд процессов, позволяющих защищать организм от инфекций. Эти процессы включают в себя изменение функциональной активности НЛ: хемотаксиса, адгезии, фагоцитоза и киллинга чужеродных частиц. Антимикробная активность НЛ включает кислородонезависимый и кислородозависимый механизмы. Последний включает в себя образование АФК – супероксидный анион – радикал (•О2-), гидроксильный радикал (OH•), перекись водорода (Н2О2), гипохлорид (OCl-), оксид азота (NO). АФК разрушают мембраны бактерий, способствуют лизису чужеродных объектов лизосомальными ферментами и определяют бактерицидную активность НЛ. Дефект какой-либо из этих функций повышает восприимчивость организма к инфекции [2]. Ранее было выявлено угнетение реактивности НЛ после противоопухолевой химиотерапии [3].
Рис. 1. Динамика изменения: а) Аинд (л, C.albicans); б) Аинд (лц, C.albicans) относительно контроля (%) для НЛ больных гемобластозами (№№4, 5) после Г-КСФ терапии.

 

Рис. 2. Динамика изменения: а) Sинд (л, C.albicans); б) Sинд (лц, C.albicans) относительно контроля (%) для НЛ больных гемобластозами (№№4, 5) после Г-КСФ терапии.

 

   В представленной работе проведено изучение кислородозависимой антикандидозной активности НЛ до и после клинического применения Г-КСФ у больных гемобластозами после курса химиотерапии методом ЛХЛ и ЛЦХЛ.
   Анализ средних, спонтанных максимальных значений (Асп) и светосуммы (Sсп) ЛХЛ и ЛЦХЛ, отражающих уровень образования АФК покоящимися НЛ, выявил увеличение генерации АФК и супероксидного анион-радикала (•О
2- ) через 144 и 360 ч после применения Г-КСФ по сравнению с контролем до введения Г-КСФ (см. табл. 2).
   Клиническое применение Г-КСФ в группе больных приводило к усилению кислородозависимой антикандидозной активности НЛ по сравнению с контролем до введения Г-КСФ (см. табл. 2). Усиление функциональной активности НЛ коррелировало с восстановлением гемопоэза (абсолютное число НЛ увеличивалось через 72 и 144 ч после введения Г-КСФ). На рис. 1, 2 показаны характерные кривые изменения антикандидозной активности НЛ больных в динамике – до введения Г-КСФ и после клинического его применения (через 3, 24, 72 и 144 ч). Отмечено, что у больных кандидозом противогрибковая активность НЛ увеличивалась через 360 ч после клинического применения Г-КСФ (см. табл. 1, 2). У больных без инфекционного осложнения максимальное увеличение активности НЛ (Аинд
, Sинд) наблюдали через 144 ч после действия Г-КСФ по сравнению с контролем до введения Г-КСФ. У больного №7 наблюдали сильное снижение продукции АФК, снижение синтеза АФК в НЛ больного можно объяснить истощением их резервных возможностей на фоне применения химиотерапии.
   Применение цитостатических препаратов оказывает угнетающее действие на фагоцитоз НЛ. Дефицит миелопероксидазы в НЛ приводит к незавершенности фагоцитоза и считается одним из факторов, предрасполагающих ко всем формам кандидоза [2]. Отмечено значительное увеличение – в 13,5 раза (n=6) – КФ
C. albicans, по данным ЛХЛ, через 144 ч после введения Г-КСФ по сравнению с КФ до введения Г-КСФ. При сравнении значений коэффициента К выявлена супрессия образования •О2- в общей доле АФК для антикандидозной активности НЛ после 3 ч с момента начала Г-КСФ терапии (см. табл. 2). По нашему мнению, одной из причин снижения может быть изменение спектра АФК в сторону форм, отличных от супероксида, за счет активации Г-КСФ ферментных систем, способных продуцировать другие формы АФК.    

Выводы
   
1. После проведенной Г-КСФ терапии наблюдается усиление кислородозависимой антикандидозной активности нейтрофилов.
   2. Г-КСФ оказывает преимущественное воздействие на миелопероксидазную активность НЛ.
   3. Г-КСФ может использоваться как дополнительное средство при лечении грибковых инфекций у больных с нейтропенией.
   4. Метод хемилюминесценции может быть рекомендован для оценки действия Г-КСФ на антикандидозную активность НЛ.

Литература
1. Смолянская А.З., Дмитриева Н. В., Кулага Е.В., Петухова И. Н. Антибиотики и химиотерапия. …; 44 (4): 25-30.
2. Сергеев А.Ю. Иммунопатология, аллергология, инфектология. 1999; 1: 91.
3. Мацнер Я. Гематол. и трансфузиология. 1993; 5: 41-3.
4. Bober LA, Bhall
a SC, Anaissie EJ. Immunopharmacology 1995; 29 (2): 111-9.
5. Kitagawa S, Yuo A, Souza LM. Biochem Bioph Res Communications 1987; 144: 1143-6.
6. Stryckmans PhD. Top Supp Care Oncol 1997; 23: 1-2.
7. Никифорова З.Н., Шевченко В.Е., Дмитриева Н.В., Арноцкая
Н.Е. Арахидоновая кислота и механизм образования активных форм кислорода в нейтрофилах онкологических больных, ВИНИТИ, №2210-ВОО,08.08. 2000
8. Токмаков А.А., Васильев В.Ю. Биохимия. 1991; 56 (2): 250-7.



В начало
/media/infektion/01_05/141.shtml :: Wednesday, 30-Jan-2002 20:20:49 MSK
© Издательство Media Medica, 2000. Почта :: редакция, webmaster